🧪 Nrf2的WB检测极易在切膜环节出错，多数情况是按理论分子量68kDa裁切而导致目的信号丢失。该蛋白富含酸性氨基酸且存在多处磷酸化修饰，造成SDS-PAGE迁移异常，实际条带位置在95-120kDa区间，而非68kDa。
⚡ 严格禁止按理论68kDa位置切膜，该错误操作会直接切掉位于95-120kDa区间的目的条带。建议采用整膜转印不切膜策略，因该蛋白常出现98kDa和118kDa双条带，局部切膜极易造成数据遗漏。
📝 为确保蛋白稳定，预处理需添加蛋白酶体抑制剂MG132（2-10μM处理4-18小时）。电泳需采用4-12%梯度胶以实现更佳分离效果。 Cell Death Discovery发表的Nrf2研究中即采用此预处理设计（图示为该研究的Nrf2条带结果），并使用Abmart同款一抗（T55136）1:1000稀释，二抗1:5000稀释。
🔬 另外，检测Nrf2核转位必须进行核质分离，并分别匹配核内参Lamin B1与质内参GAPDH，转膜全程注意保持缓冲液充足避免干胶。
