密度梯度离心（density gradient centrifugation）是外周血单个核细胞（PBMC）分离的经典方法，其分离基础在于各类血细胞的密度差异：红细胞与粒细胞密度约为 1.09–1.11 g/mL，单个核细胞密度约为 1.06–1.08 g/mL。经密度 1.077 g/mL 的分离液离心后，单个核细胞滞留于血浆与分离液界面，其余细胞成分沉降管底。
该方法成熟可靠，但分离质量高度依赖加样与界面回收两个环节的操作经验；当实验目的不仅是获得 PBMC，还需进一步去除某一特定细胞亚群时，通常需追加磁珠分选等步骤及配套设备。
FiniGet 分必得® 的 SepAid® 密度梯度离心管与 CentriSep® 免疫密度梯度细胞去除试剂盒分别针对上述两类问题设计。以下按产品定位、工作原理、技术优势与规格参数依次说明，并给出两者联用的标准流程与验证数据。
一、SepAid®：内置隔离插件的密度梯度离心管
1.1 产品定位
SepAid® 为一次性使用的密度梯度离心管，管内预置隔离插件，用于外周血、脐带血等样本中单个核细胞的快速分离。其设计目标是以物理结构替代传统密度梯度离心中依赖操作者经验的关键步骤，降低操作变异并缩短处理时间。
1.2 工作原理
传统密度梯度离心存在两个操作瓶颈。其一为加样：稀释血样需沿管壁缓慢叠加于分离液液面，加样速度或角度控制不当即造成层间混合，破坏密度界面的完整性。其二为界面回收：离心后白膜层厚度有限，移液管沿界面吸取时深度难以控制，损失目的细胞。
SepAid® 通过隔离插件解决上述问题。加样阶段，血样位于插件上方，分离液经插件中央加样孔注入下方腔体，两相在离心前由插件物理隔开，无需控制加样流速；离心阶段，细胞依密度分层，插件对界面形成机械保护，降低加减速阶段的液相扰动；回收阶段，目的细胞位于上层液相，直接倾倒即可收集，无需接触界面。
SepAid® 隔离插件结构示意：血样与密度梯度液在离心前由插件物理隔开
1.3 技术优势
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1.4 产品规格
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选型需同时满足样本体积与红细胞体积两项要求。红细胞体积不足时界面形成不充分，将直接影响分层效果。
1.5 操作条件
离心条件为 1200 × g、10 分钟，室温进行，可开启刹车，全流程 15 分钟。配套试剂为密度梯度离心液与含 2% FBS 的 PBS 缓冲液，分离液推荐 GOONIE 淋巴细胞分离液（100-306）。
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SepAid® 分离流程：加入分离液与血样、1200 × g 离心 10 分钟、倾倒收集目的细胞
SepAid® 为一次性使用产品，出厂为无菌状态，开封后请在无菌条件下操作，不可重复使用。
二、CentriSep®：基于免疫密度梯度分离的细胞去除试剂盒
2.1 产品定位
CentriSep® 为免疫密度梯度细胞去除试剂盒，用于从全血样本中去除特定细胞亚群，保留未标记的目的细胞。该方案不依赖磁珠、磁极、磁力架或分选柱，常规台式离心机即可完成，分选方式为负选（negative selection）。
2.2 工作原理
CentriSep® 的分离过程分为抗体孵育与密度梯度离心两个阶段。
抗体孵育阶段，抗体混合物中的特异性抗体识别并结合待去除细胞的表面抗原，同时介导其与样本中红细胞的交联，形成细胞聚集物。该聚集物的有效密度显著高于单个细胞。
密度梯度离心阶段，交联聚集物因密度增加而与红细胞共同沉降于管底；未被抗体标记的目的细胞密度不变，保留于分离液界面层，经收集即可用于下游实验。
由于目的细胞全程不结合抗体、不接触磁珠，其表面表型保持原始状态，无需追加洗脱步骤，亦避免了标记与洗脱过程可能引入的细胞损失。
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2.3 技术优势
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2.4 产品规格
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2.5 操作与保存条件
抗体混合物加入全血后室温孵育，随后进入密度梯度离心步骤，全程室温操作。产品于 2–8℃ 保存，有效期 12 个月。
三、SepAid® 与 CentriSep® 联用方案
3.1 联用的技术逻辑
CentriSep® 的细胞去除过程本身依赖密度梯度离心。若配合普通离心管，加样叠加与界面回收两项操作瓶颈依然存在，抗体孵育所节省的设备与时间成本将被手工操作部分抵消。
SepAid® 以结构化的密度梯度平台承接该步骤，使分离质量不再依赖加样与吸取手法。两者联用后，全血样本经一次抗体孵育与一次离心，即可获得去除目标细胞亚群的目的细胞，总耗时约 25 分钟，全程无需磁珠分选设备。
3.2 标准操作流程
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全流程约 25 分钟，其中离心 10 分钟。步骤 2 的分离液加注可在步骤 1 孵育期间完成，两段耗时可部分重叠。若仅需 PBMC 而无需去除特定亚群，省略步骤 1 即可，全流程为 15 分钟。
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SepAid® 与 CentriSep® 联用流程：抗体孵育 10 分钟、离心 10 分钟，全程约 25 分钟
3.3 与进口 S 品牌同类方案比较
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两种方案的处理时间处于同一量级，差异主要体现在采购灵活性与供货周期：SepAid® 为耗材、CentriSep® 为试剂，可按实验规模分别配置，无需为单次实验采购整套产品。
四、验证数据
4.1 SepAid® 与进口 S 品牌的 PBMC 分离比较
同一外周血样本经等体积分装后，分别采用 SepAid® 与进口 S 品牌密度梯度离心管处理，分离液均为 GOONIE 淋巴细胞分离液（100-306），分离产物经流式细胞术分析各细胞群占比。
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按流式分组加总，SepAid® 组淋巴细胞与单核细胞合计 95.02%，对照组 93.63%；高侧向散射细胞群（以粒细胞为主）占比分别为 0.93% 与 1.20%。
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两种密度梯度离心管分离产物的流式散点图比较
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细胞回收数与活率比较
数据说明：PBMC 仅包含淋巴细胞与单核细胞；结果为厂家内部流式对比实验，样本信息已脱敏处理，不代表所有样本类型的表现。
4.2 CentriSep® 去除 CD3+ 细胞的流式验证
人全血样本经 CentriSep® CD3+ 细胞去除试剂盒处理，去除前后样本分别以 FITC anti-human CD3 抗体（克隆号 OKT-3）标记，流式细胞术检测 CD3+ 细胞占 PBMC 的比例。
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CentriSep® 处理前后 CD3+ 细胞比例：43.88% 降至 0.06%
五、适用场景
结核 IGRA、ELISPOT 类检测中，样本粒细胞易自发荧光并抬高背景信号，CentriSep® 粒细胞去除试剂盒可用于检测前处理，有助于降低背景干扰。
CTC 富集方向需保留 CD45 阴性细胞群体，CentriSep® CD45+ 去除试剂盒可用于富集前处理。
固有免疫研究中需单独评估 NK 或 B 细胞应答时，可以 CentriSep® CD3+ 去除试剂盒清除 T 细胞背景，无需配置磁珠分选系统。
细胞治疗前期样本制备需无 T 细胞起始原料，以及单细胞测序前需提高 PBMC 纯度的场景，均可采用 CentriSep® 与 SepAid® 联用方案。
后续如需磁珠分选，SepAid® 分离所得 PBMC 可衔接 FiniGet 分必得® 细胞分选试剂盒，配合 140-2000 磁力架使用。SepAid® 单独使用的操作细节见 SepAid® 密度梯度离心管 PBMC 分离流程。
常见问题（FAQ）
Q：SepAid® 与 CentriSep® 是否必须配套使用？
A：非必须。SepAid® 为密度梯度离心管，配合淋巴细胞分离液即可独立完成 PBMC 分离，全流程 15 分钟；CentriSep® 为细胞去除试剂盒，用于去除样本中特定细胞亚群，配合普通离心管亦可完成。仅当实验目的为从全血直接获得去除特定亚群的目的细胞时，两者联用可将全流程控制在约 25 分钟。
Q：SepAid® 隔离插件的工作原理是什么？
A：SepAid® 管内预置隔离插件，在血样与密度梯度液之间形成物理屏障，防止离心前的层间混合。加样时血样位于插件上方，分离液经插件中央加样孔注入下方腔体；离心过程中细胞依密度分层，插件对界面形成机械保护；离心结束后目的细胞位于上层液相，可直接倾倒收集，无需沿界面吸取。
Q：使用 SepAid® 时是否需要关闭离心机刹车？
A：不需要。隔离插件对分层界面形成机械保护，离心结束后可正常开启刹车。离心条件为 1200 × g、10 分钟，室温进行。
Q：SepAid® 单独使用为 15 分钟，联用 CentriSep® 为 25 分钟，差异在哪里？
A：差异在于抗体孵育步骤。联用 CentriSep® 时需先将抗体混合物加入全血并室温孵育 10 分钟，使抗体完成靶细胞标记与红细胞交联，随后再进入加分离液、加样、离心与倾倒步骤。两种方案的离心时间均为 10 分钟。
Q：CentriSep® 的样本类型是全血还是 PBMC？
A：样本类型是全血，具体适用范围以对应产品说明书为准。
Q：CentriSep® 处理后的目的细胞能否直接用于下游实验？
A：可以。CentriSep® 采用负选策略，目的细胞全程不结合抗体、不接触磁珠，收集后可直接用于流式细胞术、ELISPOT、分子检测与细胞培养等下游实验。
