下面西安凯新生物科技有限公司MISS,WU按 DSPE-PEG 末端CLS / N3 / FITC 分别给出一套可直接执行的配方。默认 PEG 规格为 DSPE-PEG2000；若换成 PEG1000、PEG3400、PEG5000，投料摩尔比不变，但质量需按实际分子量重算。
一、DSPE-PEG-Cholesterol / DSPE-PEG-CLS
用途： 共组装进入脂质体/胶束，提高膜稳定性和 PEG 屏蔽性；本身不用于末端偶联。
1.缓冲液： PBS，pH 7.4；也可用 10 mM HEPES，pH 7.4。
2.pH： 7.2–7.6。
3.摩尔比：
常规长循环脂质体：HSPC : Chol : DSPE-PEG2000 = 65 : 30 : 5；
若需更强膜稳定性，可用 HSPC : Chol : DSPE-PEG2000-CLS = 56.2 : 38.5 : 5.3；
DSPE-PEG-CLS 一般占总脂质 3–5 mol%，不建议超过 6 mol%。
4.反应/组装时间：
成膜后 37–40℃ 水化 30 min；
挤出或超声后室温或 4℃ 保存，4℃ 避光保存。
5.纯化方案：
未包封药物或游离脂质用 Sephadex G-50、100 kDa 超滤管或透析 去除；
透析条件：PBS，4℃，每 2–4 h 换液一次，共 12–24 h；
检测粒径、PDI、Zeta 电位，必要时测总磷或脂质浓度。
二、DSPE-PEG-Azide / DSPE-PEG-N3
用途： 表面点击化学平台；通常先掺入脂质体，再与 DBCO/BCN/炔基分子偶联。
2A. 掺入脂质体
1.缓冲液： PBS，pH 7.4；或 10 mM HEPES，pH 7.4。
2.pH： 7.2–7.6。
3.摩尔比：
HSPC : Chol : DSPE-PEG2000-N3 = 65 : 30 : 5；
功能化密度较低时可用 1–3 mol%；常规 3–5 mol%。
4.时间： 成膜后 37–40℃ 水化 30 min，挤出 5–10 次至粒径均一。
5.纯化： 挤出后先通过 100 kDa 超滤或透析 去除游离脂质和未包封物。
2B. 点击化学偶联
1.缓冲液： PBS 或 HEPES，pH 6.8–7.4；有机共溶剂 DMSO ≤10%。
2.pH： 6.8–7.4。
3.摩尔比：
叠氮 : 炔基/DBCO 分子 = 1 : 1.2–1.5；
若偶联效率不足，可提高至 1 : 2。
4.反应时间：
SPAAC 无铜点击：室温避光 1–2 h；
CuAAC 铜催化点击：室温 30–60 min，随后必须去除铜离子。
5.纯化方案：
反应后过 Sephadex G-25/G-50、脱盐柱或 100 kDa 超滤；
透析 PBS，4℃ 避光 12–24 h；
用荧光/UV、DLS 或 SDS-PAGE/流式确认偶联效率。
三、DSPE-PEG-FITC
用途： 荧光示踪脂质体/胶束；FITC 已预先偶联在 PEG 末端，通常不再进行二次反应。
1.缓冲液： PBS，pH 7.2–7.4；避免 pH < 6.5，否则 FITC 荧光会明显下降。
2.pH： 7.2–7.4。
3.摩尔比：
共组装时：HSPC : Chol : DSPE-PEG2000-FITC = 63–64 : 30 : 1–2；
FITC 含量过高易自淬灭，建议先做 0.5、1、2 mol% 梯度。
4.时间：
成膜后 37–40℃ 水化 30 min；
全程避光；挤出后 4℃ 避光保存。
5.纯化方案：
过 Sephadex G-50、100 kDa 超滤或透析 去除游离 DSPE-PEG-FITC；
透析 PBS，4℃ 避光 12–24 h；
用荧光光谱或流式/酶标仪测定 FITC 信号，并与脂质浓度做线性校准。
通用注意点：
1.DSPE-PEG 储备液用 无水 DMSO、DMF 或氯仿/甲醇 配制，分装后 -20℃ 避光保存。
2.含 FITC 或叠氮的样品需全程避光；叠氮操作需在通风橱中进行。
3.DSPE-PEG 类在脂质体中常用 3–5 mol%；FITC 示踪建议 ≤2 mol%。
4.纯化优先选 凝胶过滤、超滤或透析，避免高速离心导致脂质体破裂。
西安凯新生物科技建议：如果你的目标是在同一批脂质体里同时实现 CLS 稳定 + N3 点击偶联 + FITC 示踪，可以按 HSPC : Chol : DSPE-PEG2000-CLS : DSPE-PEG2000-N3 : DSPE-PEG2000-FITC = 58 : 30 : 5 : 5 : 2 起步，再根据粒径和荧光强度微调。
（以上实验均属于实验室科学研究范畴，DSPE-PEG-FITC/DSPE-PEG-N3/DSPE-PEG-Cholesterol试剂严禁用于人体或动物临床实验。）
